科普:pcr实验室是做什么的?
一、什么是PCR实验室?
PCR实验室又叫基因扩增实验室。PCR是聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)的简称。是一种分子生物学技术,用于放大特定的DNA片段,可看作生物体外的特殊DNA复制。通过DNA基因追踪系统,能迅速掌握患者体内的病毒含量,其精确度高达纳米级别,精确检测乙肝病毒在患者体内存在的数量、是否复制、是否传染、传染性有多强、是否必要服药、肝功能有否异常改变能及时判断病人最适合使用哪类抗病毒药物、判断药物疗效如何、给临床治疗提供了可靠的检验依据。
二、PCR实验室布局
原则上分为四个区域:试剂准备区、样品制备区、扩增区和扩增产物分析区。
PCR实验室原则上为试剂准备区、样品制备区、扩增区和扩增产物分析区四个单独的工作区域并设有专用走廊,各工作区域应设缓冲间,工作区与缓冲间宜安装连锁装置。不同功能的工作区应是分隔独立的,各工作区有明显的标志,不能直通,如果紧密相连,需安装物品传递窗。
PCR实验室区域的设置并不是一成不变的,以下几种情况需要说明:
1.如果样本在扩增之前需要粉碎处理,则需要增加一个区域用于样品的粉碎。
2.如果采用实时荧光PCR法,则扩增区和分析区可以合并为一个区。
3.如果采用全自动化PCR分析仪,则标本制备区、扩增区和分析区可以合并为一个区。
前两区为扩增前区,后两区为扩增后区,扩增前区与扩增后区应严格分开。实验材料、试剂、记录纸、笔、清洁材料等,只能从扩增前区流向扩增后区,即从试剂准备区、样品制备区到扩增区和扩增产物分析区,不得逆向流动。实验室的气流也应从扩增前区流向扩增后区,不得逆向流动。各工作区顶部应安装紫外灯,紫外灯的波长为254nm,每20㎡一支40W的紫外灯。
三、PCR实验室通风系统及压力控制
四大区域应形成单向流线、宜采用全送全排。
各区域之间应具备单向的实验工艺流、物流、人流与气流,形成单向流程的保护屏障,避免实验之间的相互干扰,防止气溶胶扩散对实验过程造成污染。
PCR实验室并没有严格的净化要求,但是为避免各个实验区域交叉污染的可能性,宜采用全送全排的气流组织形式,严格控制送、排风的比例以保证各实验区压力要求。
另外,PCR实验室内通常有生物安全柜、通风柜等生产设备,这类设备排风量大且使用时间有间隔性,并不与空调系统运行时间一致,这就导致有这些设备的房间在设备启停的时候很容易失压,原本正常的压力梯度瞬间就破坏了。这正是PCR实验室空调系统设计的难点所在。
四、PCR实验室装修装饰
材料要求:
实验室围护结构应牢固、气密性好。所有阴阳角宜采用圆弧过渡,墙体内壁光洁、不积尘、耐腐蚀、易清洗消毒。地面使用PVC卷材或环氧树脂自流坪,材料应满足无缝隙、无渗漏、光洁、耐腐蚀的要求。
必备条件:
1、必须拥有标准的的PCR荧光实验室。
2、检测设备必须符合标准PCR荧光实验室设置要求:荧光定量PCR仪+实时荧光定量试剂+通用电脑+自动分析软件,构成PCR-DNA/RNA实时荧光定量检测系统。
3、必须通过国家临床检验中心的验收和认证。
4、PCR实验室必须建立严格的实验室管理制度、建立标准化操作程序(SOP)、建立系列质量管理文件等,确保实验室日常运行符合国家卫生部的要求,确保检测结果准确、确保实验室卫生安全,确保实验室长期稳定运行。
5、必须在无菌无尘环境下进行操作。
五、PCR 实验室的工作流程
首先,需要采集合适的样本。样本的类型根据检测的目的而定,可以是血液、组织、细胞等。接着采集到的样本需要进行处理,以提取出其中的 DNA 或 RNA。这个过程需要严格的操作规范,以确保样本的质量和纯度。然后,将提取出的 DNA 或 RNA 加入到 PCR 反应体系中,在特定的温度和时间条件下进行扩增。PCR 扩增过程需要精确的温度控制和时间管理,以确保扩增的准确性和效率。最后扩增后的产物需要进行检测和分析。常用的检测方法包括凝胶电泳、荧光定量 PCR 等。通过检测和分析,可以确定样本中是否存在特定的 DNA 或 RNA 片段,以及其含量和性质。
六、PCR 实验室的重要性
1、快速准确的检测
PCR 技术具有高度的敏感性和特异性,能够在短时间内检测出微量的病原体或基因突变。这对于疾病的早期诊断和治疗至关重要。
2、为科学研究提供有力支持
PCR 实验室为生命科学研究提供了强大的工具,帮助科学家们深入了解生命的奥秘,推动科学技术的发展。
3、保障公共卫生安全
在传染病防控、食品安全等领域,PCR 实验室能够及时检测出病原体,为公共卫生安全提供保障。